貓瘟病毒檢測卡由預(yù)包被貓瘟病毒重組E2蛋白的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測豬血清用上了、血漿樣本中貓瘟病毒抗體開展研究。實驗時在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢樣本進行探討,經(jīng)溫育后若樣品中含有貓瘟病毒抗體尤為突出,則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后.
再加入酶標(biāo)記物還不大,與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合好宣講;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,在孔中加TMB底物液保障性,與酶反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物不斷進步,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后領先水平,產(chǎn)物變?yōu)辄S色發揮重要帶動作用;用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有貓瘟病毒抗體確定性。
貓瘟病毒檢測卡的檢驗步驟和方法:
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條意料之外,設(shè)空白對照1孔必然趨勢、陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封橋梁作用,2~8℃保存文化價值。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl;陰講故事、陽性對照孔分別加入陰單產提升、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl基礎。
4.混勻日漸深入,置37℃反應(yīng)30分鐘。
5.扣去孔內(nèi)液體引領作用,每孔加滿洗滌液預期,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,拍干加強宣傳。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應(yīng)30分鐘對外開放。
7.洗滌互動式宣講,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A用的舒心、底物液B各50μl結構,混勻,37℃避光反應(yīng)10分鐘產能提升。
9.每孔加終止液50μl發揮,混勻,用空白孔調(diào)零適應能力,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值)設施。